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柠檬酸-柠檬酸钠粉剂(10mM,pH6.0)可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果；通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理；抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果；当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。

组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。柠檬酸盐、EDTA或Tris等缓冲液在热的条件下可以使被福尔马林屏蔽的抗原重新暴露出来，同时又不会对抗原表位造成破坏，从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高诊断的准确率。柠檬酸钠抗原修复液是一种最常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。

• 浸泡在柠檬酸—柠檬酸钠溶液中，最佳加热时间根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 柠檬酸—柠檬酸钠溶液的配制
  取柠檬酸—柠檬酸钠粉剂(10mmol/L,pH6.0)1份溶解于1L去离子水或双蒸水，即为柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液，无需调节pH值。
  
• 石蜡切片
  
  • 脱蜡至水
    
    • 二甲苯或脱蜡透明液脱蜡3次，每次3～5min。
      
    • 无水乙醇脱水2次，每次3～5min。
      
    • 95%的乙醇，3～5min。
      
    • 90%的乙醇，3～5min。
      
    • 80%的乙醇，3～5min。
      
    • 70%的乙醇，3～5min。
      
    • 蒸馏水冲洗2次，每次3～5min。
  • 抗原修复
    
    • 将切片浸泡在柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液中，95℃或沸水加热约10～30min。
      
    • 柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液使用前需预热到95～100℃，如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发，随后大约在20～30min内冷却至室温。
  • 免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。
    
  • 进行封闭等后续的免疫染色步骤。
• 冰冻切片
  
  • 免疫染色洗涤液洗涤切片5min。
    
  • 将切片浸泡在，即为柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液中，95℃或沸水加热约10～30min。
    
  • 柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液使用前预热至95～100℃，如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发，随后大约在20～30min内冷却至室温。
    
  • 免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。
    
  • 进行封闭等后续的免疫染色步骤。
• 其它样品
  其它样品参考石蜡切片或冰冻切片进行操作。